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层析柱上柱子后压力大怎么办

先试试空白运行，就是不经过柱子光走系统，看看压力是多少，检查是否系统压力过大。

如果系统压力正常，则检查溶液是否澄清，有无沉淀或泛白。

如果溶液没有问题，检查柱头是否堵塞，柱头前的滤膜是否需要清洗。

然后检查下填料是否完整，有无被压碎的填料或者有无杂志吸附在填料上，参照说明书清洗再生下填料。

层析柱压力过大容易压碎填料，需要及时暂停减小压力后继续上柱。

平衡柱子

即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如、、等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。

当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。

上样

1、干法上样

①、制样：将物料用极性较大的且洗脱剂中需用的溶剂溶解成浆状（或溶液状），再加入硅藻土（或硅胶）充分混合，晾干；再粉碎成粉未状，混合均匀。

②、将制好的样品，置于预柱中或层析柱上端硅胶床层的上面，铺平；再放上滤布（网），筛板，再按图装好柱上端封头。

2、 湿法上样

①、制样：将物料用极性比硅胶小的溶剂（例如：、乙醇-混合液、、等）溶解或制成浆状，直接倒在层析柱硅胶床层的上面，铺平即可（如果上样液多，也可以用泵（或氮气）慢慢打（压）入柱中）。

②、同上，放上滤布（网）筛板，装好上封头。

大孔吸附树脂应用过程中,需要注意一些问题

在大孔吸附树脂的应用过程中,也需要注意一些问题:

①储存与运输的过程中,要防止树脂脱水或受冻而被破坏;

②使用前应按照一定的步骤进行预处理,以去除树脂内可能含有的分散剂、致孔剂、惰性溶剂等化学残留;

③在树脂装柱运行后,可能有堵塞发生,造成的原因主要有悬浮物污堵、生物

堵塞、铁及镁污染和硫酸钙沉淀,应采用相应的处理措施将堵塞物去除;

④脱附工艺中会产生碱性脱附液,需要进一步处理。